副豬嗜血桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書

1、試劑盒簡介貨為了適應副豬嗜血桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒快速檢測和疫病研究的需要，本公司參照 OIE 國際標準中規定的引物序列，經多次實驗及系統優化，開發生產了本試劑盒。應用本試劑盒進行檢測具有快速、靈敏、特異、準確、安全操作簡單、應用廣泛和高通量檢測等特點及優點。2、試劑盒組成:

試劑盒組成包括核酸提取試劑和核酸擴增試劑，具體組成參見表 1：s

表 1：試劑盒組成（50test/盒）

樣本處理及要求：

1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2.  血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：本公司提供試劑盒免費代測服務。需要其他檢測試劑盒請咨詢銷售人員。

試劑盒組成及試劑配制：

1.  酶聯板（Assay plate ）：一塊（96孔）。

2. 標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶

4. 生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

樣本：血清 血漿 組織勻漿等液體樣本

標記物：血清 血漿 組織勻漿等

應用：僅用科研實驗檢測定量，定性檢

檢測方法：夾心法

技術要求：全程按說明書步驟檢測，操作規范，專業，儀器設備齊全。

規格：48t/96t

性狀：液體

運輸方式：快遞發貨

有效期：6個月品

特點：靈敏性高，---性，吸附均勻，吸附性好，回收利用率高，是一款可以讓您放心選購的產品。

使用范圍：此產品供科研實驗使用，不得用于---。

用途：用于測定人血清、血漿、組織及相關液體樣本中的含量或活性。