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ELISA試劑盒實驗包被和封閉的原理
日期：2025-06-04 18:38
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摘要：
ELISA試劑盒實驗包被和封閉的原理：
實驗時，需要將抗原或捕獲抗體包被于固相載體上，通過檢測分子（酶或熒光基團），將化學信號轉換為電信號，以OD值或發光值的結果，對靶蛋白進行定量分析。
ELISA 中的固相載體物很多，常用的是聚苯乙烯，具有較強的蛋白質吸附性。具有可制成各種形式，且不參與化學反應的特點。與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯，它質軟板薄，可切割，價廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對蛋白質的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有時也略高。除塑料制品外，固相酶免 疫測定的載體還有兩種材料：一...
ELISA試劑盒實驗包被和封閉的原理：
實驗時，需要將抗原或捕獲抗體包被于固相載體上，通過檢測分子（酶或熒光基團），將化學信號轉換為電信號，以OD值或發光值的結果，對靶蛋白進行定量分析。
ELISA 中的固相載體物很多，常用的是聚苯乙烯，具有較強的蛋白質吸附性。具有可制成各種形式，且不參與化學反應的特點。與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯，它質軟板薄，可切割，價廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對蛋白質的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有時也略高。除塑料制品外，固相酶免 疫測定的載體還有兩種材料：一是微孔濾膜；另一種載體是以含鐵的磁性微粒制作的。
在 ELISA 中，抗原和抗體的質量是實驗是否成功的關鍵。ELISA 所用抗原有三個來源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動物組織或體液、微生物培養物等，一般含有多種抗原成分，需經純化。重組抗原和多肽抗原均為人工合成品，使用安 全，而且純度高，干擾少的優勢。但制備的技術難度較大，制備成本高。
將抗原或抗體固相化的過程稱為包被。因為載體的物質不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯 ELISA 板為載體時，需將抗原或抗體溶于緩沖液中，加于 ELISA 板孔中在 4℃ 過夜。如果包被液中的蛋白質濃度過低，固相載體表面能被此蛋白質完全覆蓋，后加入的血清標本和酶結合物中的蛋白質也會部分地吸附于固相載體表面，后產生非特異性顯色，導致本底值偏高。在這種情況下，需要在包被后用牛血清白蛋白再包被一次，消除干擾，這一過程也被稱為封閉。
通常包被和封閉都是在生產時由廠家完成的，只需要知道原理即可，實驗時無需操作。