細(xì)胞復(fù)蘇過程

細(xì)胞復(fù)蘇是指將凍存在液氮里邊或者-80℃冰箱中的細(xì)胞解凍，再培養(yǎng)傳代。細(xì)胞復(fù)蘇應(yīng)采用快速融化的方法，這樣的目的是為了讓細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)融化，從而避免慢悠悠的融化，使得水分滲入細(xì)胞內(nèi)再結(jié)晶，從而對(duì)細(xì)胞再次造成傷害，從而影響細(xì)胞的存活率。

細(xì)胞復(fù)蘇過程：

1：細(xì)胞是凍在-80℃的環(huán)境里面的，所以拿出來后，應(yīng)該盡快去37℃水浴鍋里解凍（我一般是放在PE手套里面，然后在37攝氏度的水域上快速融化。）這一步的操作不要超過一分鐘！

2：用預(yù)熱的培養(yǎng)基稀釋凍存的細(xì)胞（這步我會(huì)把融化的凍存液加入到15ml的管子里，加入3ml的預(yù)熱的培養(yǎng)液，在超凈臺(tái)里完成）

3：離心200g 5-10min，具體的離心的時(shí)間不同的細(xì)胞略有不同得具體得看培養(yǎng)的protocol

4：在離心以后，倒掉上清（因?yàn)閮龃嬉豪镉?/span>DMSO, 它的作用是在凍存細(xì)胞時(shí)加入，加入的量大概是總體積的10%，起到防凍劑的作用，防止冷凍過程中細(xì)胞內(nèi)形成冰晶。）

5：用預(yù)熱的培養(yǎng)液重懸細(xì)胞（根據(jù)培養(yǎng)的細(xì)胞皿的體積調(diào)整，我參照了GM12878,K562的培養(yǎng)protocol，剛開始的細(xì)胞密度不要超過10^6 /ML，但是細(xì)胞的密度也別太稀了，要不然長(zhǎng)的會(huì)不好)

6：放到37℃，5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞。

PS：在看細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的時(shí)候，有一個(gè)詞叫做“慢凍快融”，所以在解凍細(xì)胞的時(shí)候，在加入預(yù)熱的培養(yǎng)基洗細(xì)胞之前，操作盡量的快，減少DMSO對(duì)細(xì)胞的傷害。我的凍存液的配方是：90%的FBS+10%的DMSO，凍存效果沒問題！